Amylase pH et température

Matériel/binômes
                                           pour l'action du pH                                                              pour l'action de la température
tabpH tabT
matospHT temp
bm1 bm2
pH

Labo
Préparation de l'amidon à différents pH (prévoir 2 heures)
Préparation de l'amidon utilisé pour l'action de la température.
Préparation de l'amylase.

Protocole
Commencer par le paramètre pH
Placer 3 gouttes de Lugol dans chaque puits , annoter les cupules sur la feuille A4
Indroduire 10mL de solution d'amidon de chaque pH dans un tube à essai.Identifier les tubes.plaquepH
Ajouter 2 mL d'amylase dans chaque tube.
Boucher et agiter par retournement.
Essuyer le bouchon entre chaque tube.
A T0 prélever 1 mL dans chaque tube et transvaser dans le puits adéquat de la plaque.
Placer les tubes à 37°C
Déclencher le chronomètre.
Laisser la pipette dans le tube.(1 pipette /tube)
Prélever ainsi 1mL dans chaque tube toutes les 3 mn jusqu'à 15 mn

Résultats
lugol pH
Le test à la liqueur de Fehling ne serait pas valable dans ce cas puiqu'on serait amener à modifier le pH.
Voir l'article de Didier Pol: Liqueur de Fehling.
Conclusions à venir

Paramètre Température
Placer 3 gouttes de Lugol dans chaque puits, annoter les puits sur la feuille A4.
Introduire 10 mL d'amidon (pH neutre) dans 5 tubes, identifier les tubes.
Introduire 2 mL d'amylase dans 5 tubes.
Placer les tubes dans les conditions de température pendant au moins 3 mn.plaqueT
Relever les températures des bains-marie, becher avec glace, T° ambiante.
Températures: 3°C (glace), 21°C (T ambiante), 37°C bain-marie sur paillasse, 50°C et 70°C bains-marie au fond de la salle.
Pour chaque condition de T°, transvaser le tube contenant l'amylase dans le tube d'amidon, boucher, agiter par retournement.
Prélever 1 mL et disposer dans un puits adéquat de la plaque.
Laisser la pipette dans le tube et placer-le dans la condition de T°.
Prélever 1 mL toutes les 3 mn pendant 15 mn
Relever les résultats.
Après le dernier prélevement, placer 2 mL de liqueur de Fehling dans chaque tube et placer les au  bains-marie au fond de la salle
(ont été modifié pour avoir 75-80°C) pendant 2mn maximum.Laisser un plus longtemps le tube qui était placé à 3°C.

Résultats
lugol-T
Image de mes tests, la dernère série "max" est inutile.
Rq: l'amylase utilisée n'est pas une amylase d'origine salivaire ou pancréatique, mais d'origine bactérienne dont la température optimum est de 50°C. 
LF T
Conclusions à venir

2016: petit souci avec un nouvel amidon qui n'est pas une suspension colloïdale.