Extraction de l'ADN d'oignon


Matériel au bureau
Oignons épluchés coupés en 4, conservés à + 4°C juste avant.
1 mixer
1 cristallisoir
1 grosse cuillère
1 distributeur de produit vaisselle + 1 petite cuillère plastique.
Mixer brivèment les oignons (5s maxi), placer le cristallisoir, distribuer 1 grosse cuillère dans le mortier (mais rase) à chaque binôme.

Matériel/binôme

1portoir avec 1 tube à essai
2 pipettes plastiques
1 pot de sel fin
1 bouteille d'eau déminéralisée
1 éprouvette de 100 mL
1 mortier + pilon
1 petite cuillière
1 flacon de carmin acétique
1 chiffon 
1 flacon d'éthanol (=alcool à 90°) qui est stocké au frigo, distribué au dernier moment
1 potence
1 entonnoir fabriqué avec une
bouteille plastique
filtration rapide = morceau de rideau fin
maintenu à l'entonnoir par un élastique
Très pratique les crans de la bouteille!
1 becher

Protocole
Dans le mortier, sur l'oignon déjà mixé, ajouter une cuillère à café de sel.
Le sel sert à faire "sortir " l'eau contenue dans les cellules et à séparer l'ADN(protéine) d'autres protéines.
Broyer à l'aide du pilon.
Le mixage et le broyage servent à dissocier les tissus, à séparer les cellules pour augmenter la surface de contact avec les réctifs utilisés ensuite.
Ajouter 15 mL d'eau mesuré avec l'éprouvette.
Broyer à nouveau pendant au moins 2 mn

Ajouter une cuillère à café de liquide vaisselle (au bureau)
Le liquide vaisselle est un "dégraissant" il va détruire les membranes cellulaires puis les membranes nucléiques qui sont composées entre autres de lipides.
Poursuivre le broyage pendant au moins  2 mn
Filtrer avec l'entonnoir muni du filtre "maison", au dessus du bécher

Prélever 2 x 2,5 mL de filtrat avec une pipette plastique, (ou bien 2 x 2mL et 1x 1 mL) afin d'avoir 5 mL et placer dans le tube à essai.
Avec une autre pipette, prélever de la même manière que précédement 5 mL d'alccol, verser lentement le long de la paroi du tube à essai en inclinant celui-ci à 45°. L'alccol et le filtrat ne doivent pas se mélanger.
L'ADN est soluble dans l'eau donc invisible, et il est peu soluble dans l'alcool donc il précipite et est visible.
Ajouter 2 -3 goutees de carmin acétique.
Faire faire 5-6  mouvements en rond au tube (verticalement).
Poser sur le portoir. Attendre au moins 5 mn

Observer

   
   A l'interphase: entre les 2 phases filtrat-alcool , des filaments blancs sont visibles.
Les bulles provoquées par le réchauffement de l'alccol entrainent les filaments qui commencent à se colorer vers le haut.
Au bout de 20 mn, les filaments d'ADN sont colorés en rose-rouge.
Rq: Le filtrat n'est pas clair à cause de la filtration rapide.
Ici j'ai mis un peu trop de colorant.
 

Conclusion
Le support de l'IG (information génétique) est contenu dans le noyau des cellules, le noyau contient les chromosomes, et les chromosomes sont constitués d'ADN (acide désoxyribonuléique).
 
 Cellules d'oignon
 Noyaux colorés en rose-rouge
 lien1 TP
  
chromosomes de cellules d'oignon colorés en rose foncé
lien2 TP
  
 ADN d'oignon coloré en rose

Commentaires  

 
-5 #1 Guillaume 05-06-2014 10:37
"acide désoxyribonuclé ique" plutot, dans la dernière phrase
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